Базофилы в шТАБе

01 июля 2019

Автор(ы):
Дмитрий Патыко


Фото Виталия Гиля, "МВ"
Фото Виталия Гиля, "МВ"
Анафилактический шок у пациента после инъекции антибиотика или вакцины  в большинстве случаев является непреднамеренным  и непредсказуемым.  А надежных стопроцентных методов диагностики реакции гиперчувствительности немедленного типа на лекарственные средства, обладающие высоким аллергенным потенциалом,  в мире пока не существует.

Анамнез аллергологический 
 

В Беларуси для диагностики лекарственной аллергии могут использоваться не только кожные пробы, но и лабораторные методы — реакция дегрануляции тучных клеток и реакция агломерации лейкоцитов. Однако чувствительность этих тестов оставляет желать лучшего, они дают высокий процент ложноположительных и ложноотрицательных результатов. Для диагностики лекарственной аллергии существует также провокационный тест, но он выполняется крайне редко ввиду высокого риска серьезных осложнений. 

Для того, чтобы заподозрить аллергическую реакцию, крайне важно зафиксировать ее характер в медицинской документации, описать характер высыпаний и другие сопутствующие общие и местные симптомы. Установленная еще в детском возрасте аллергия на антибиотик с большой вероятностью может не подтвердиться у взрослого. 

Специфические антитела класса IgE к некоторым лекарственным средствам имеют склонность со временем исчезать, и человек вновь может принимать данный антибиотик. 

С большим интересом было встречено сообщение о принципиальной возможности нового метода диагностики гиперчувствительности немедленного типа по уровню активации базофилов. Это самая малочисленная группа лейкоцитов (менее 1 % всех лейкоцитов периферической крови). Как в организме человека, так и в пробе крови in vitro при встрече с аллергеном базофил претерпевает дегрануляцию, то есть разрушение находящихся внутри него гранул и высвобождение провоспалительных медиаторов или цитокинов. 

Количество молекул-маркеров, которые фиксируются методом проточной цитометрии, говорит об уровне реакции на специфический аллерген.

Реакция в пробирке

— Роль базофилов в иммунологических и аллергических реакциях длительное время игнорировалась, поскольку изучение их функций было в значительной мере ограничено техническими возможностями, — поясняет научный сотрудник лаборатории иммунологии и клеточной биотехнологии РНПЦ эпидемиологии и микробиологии Ирина Романова. — Базофилы трудно выделить из периферической крови вследствие их крайне низкого содержания, к тому же присутствует риск активации клеток в процессе манипуляций с кровью. При этом имеется лишь небольшое число подходящих для проведения исследований клеточных линий и моделей животных. Возможности проточной цитофлуориметрии позволяют с легкостью изучать самые немногочисленные популяции клеток периферической крови, оценивать их функцию в норме и при патологии. Над этим тестом за рубежом начали работать более 20 лет назад, но в полной мере взять его на вооружение, в том числе в последнее десятилетие, удалось лишь недавно, когда были получены определенные результаты по эффективности диагностики пыльцевой, пищевой, лекарственной и других видов аллергии. Огромным преимуществом теста активации базофилов (ТАБ) является возможность исследовать редкие виды аллергии, для которых недоступны или малоэффективны другие методы диагностики. 

До сих пор отсутствовали стандартизированные протоколы теста активации базофилов, что указывало на необходимость оптимизации и стандартизации методики. Чтобы сделать ее пригодной  для практического применения, авторам проекта (исполнитель —Ирина Романова, научный руководитель — ныне директор Института биофизики и клеточной инженерии НАН Беларуси, кандидат мед. наук Андрей Гончаров) предстояло учесть множество нюансов.

В частности, в экспериментах и в клинических опытах были отработаны требования по времени забора, срокам и температуре хранения образца периферической крови, взятой для диагностики IgE-опосредованных реакций. Исследовали множество различных активирующих факторов и остановили свой выбор на самых приемлемых. Был найден оптимальный способ гейтирования базофилов на проточном цитометре, предложены новые маркеры их активации и дегрануляции. Удалось добиться повторяемости и воспроизводимости метода, который обеспечивает чувствительность для аллергии на системные антибиотики на уровне 75 % и специфичность порядка 90 %. При этом на одно тестирование уходит не более полутора часов. 



Комментировать


comments powered by HyperComments